Travaux pratique Microbiologie clinique : Techniques de base
OUNIS Sabrina
Mardi
12/11/2018
TP n°1 Bactériologie
« Initiations aux
techniques de microbiologie clinique »
I.Introduction
Parmi les piliers de la microbiologie clinique (pratique):
l’ensemencement sur milieux solide et liquides.
On utilisera comme exemple : le prélèvement
hépatique d’une volaille
Dans notre TP on aura pour finalités :
- Assimiler les règles de travail dans un laboratoire de microbiologie
- Maitrise de la technique d’ensemencement bactérien
- Importance de l’antisepsie dans la réussite du protocole
- Apprendre à lire et interpréter les aspects microscopique et macroscopique de la semence, et ce, après 24h d’incubation
II. Matériel utilisé
II.1. Matériel biologique :
Foie de
volaille mis dans des boites, qui, à l’issu de son incision, on aura la chance
de l’ensemencer dans un milieu de culture adéquat.
II.2. Matériel non biologique :
II.2.a. Avant la manipulation :
Désinfectant ( désinfecter les mains)
Eau de Javel et
tissu (désinfecter paillasse et espace de travail )
II.2.b. Pendant la
manipulation :
- Autoclave : pour une stérilisation optimale du matériel non biologique avant la manipulation.
- marqueur (identifier le m° de culture et semence)
- Fiche de renseignement sur le prélèvement
- Bec bunsen : afin de stériliser le matériel et le milieu de travail
- Pince : afin de faciliter l’utilisation du bistouri et prise de l’incision
- Bistouri : à l’aide duquel on fait incision du parenchyme hépatique
- Bain d’alcool : afin de refroidir le bistouri après stérilisation sous l’effet bec bunsen
- Anse de platine : pour l’ensemencement (solide ou liquide)
- Boîte de Pétri : contenant le milieu de culture solide adéquat, on y met notre semence à l’aide de l’anse de platine
- Mortier : afin d’écraser les cellules hépatiques avant de les déposer dans le tube à bouillon nutritif.
- Tube à bouillon nutritif : comme son nom l’indique, sert à ensemencement dans un milieu liquide
- Etuve : Pour l’incubation des semences pendant 24 heures dans une température ambiante (37° approximativement)
II.2.c A la fin de la manipulation :
- Eau de Javel : (voir II.2.a)
- Désinfectant pour les mains : (voir II.2.a )
III.
Méthodologie :
Dans ce
qui va suivre, on va citer l’essentiel de la technique d’ensemencement dans un
milieu de culture (étapes)
III.1.
Milieu liquide :
Cas
1
1.
Nettoyer la paillasse en utilisant l’eau de javel en faisant des
mouvements excentriques
2.
Allumer le bec bunsen afin de stériliser le milieu de travail
3.
Stériliser le Bistouri sur le bec bunsen, ensuite le refroidir dans le
bain d’alcool..après : faire des incisions avec dans le prélèvement
hépatique.
4.
Prendre une partie du foie, la mettre dans le foie et l’écraser ensuite
pour faire sortir les bactéries.
5.
Prendre un volume de à l’aide de la pipette ou de l’anse de platine et
l’ensemencer dans le bouillon nutritif prêt au préalable
6.
Mettre l’ensemencement dans l’étuve à température ambiante (37°)
pendant 24h
7.
Désinfecter mains et milieu de travail
Cas 2
- 1 Etapes (1.2.3 du Cas 1)
- 2 Mettre l’incision dans le bouillon nutritif adéquat.
- 3. Mettre l’ensemencement dans l’étuve à température ambiante (37°) pendant 24h
- 4. Desinfecter
III.2. Milieu solide :
- 1. Etapes 1.2.3 de III.1
- 2. Prendre la boîte de Pétri et y mettre la partie d’incision à l’aide de l’anse de platine comme suit : (technique des quatre quadrants)
- 3. Mettre l’ensemencement dans l’étuve à température ambiante (37°) pendant 24h
- 4. Désinfecter les mains et le milieu de travail
IV. Lecture et interprétation :
Pas encore disponible
Bonne lecture
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